（货号：WLB8201KIT-01）
订购可在线咨询，或者直接联系：13911291885（同微信号），QQ：2208618493 
【产品名称】
通用名称：DNA恒温快速扩增微球试剂盒（基础型）-01
【包装规格】
货号：WLB8201KIT-01
规格：96份/盒
【原理概述】
本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术：在常温恒温下，重组酶和引物形成蛋白/单链核苷酸的复合体Rec/ssDNA，在辅助蛋白和单链结合蛋白SSB的帮助下，侵入双链DNA模板；在侵入位点形成D-loop区域，并开始对DNA双链进行扫描；待找到与引物互补的目的区域后，复合体Rec/ssDNA解体的同时，聚合酶也结合到引物的3’末端，开始链的延伸。
【产品特点】
本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、反应时间短（仅需30 min）等优点，反应组分为微球状态，操作简便，易于保存。
使用金属浴、水浴锅等即可进行反应操作，无需购买PCR仪等价格高昂的设备。
【引物设计】
建议使用长度在30-35 bp的引物，引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度；引物设计避免形成二级结构而影响扩增；扩增子长度建议在150-300 bp，通常不超过500 bp。
【试剂盒储存】
1．储存条件：储存温度 ≤ -20 °C（± 5 °C）恒温环境，避光保存，避免重压、反复冻融；
2．产品有效期：14个月；
3．生产日期见外包装。
【试剂盒组成】
| 组成 | 含量 |
| buffer微球 | 8 份/管×12管 |
| 正对照模板 | 30 μL×2管 |
| 正对照引物Mix | 60 μL×2管 |
| 微球试剂 | 8 份/管×12管 |
| 使用说明书 | 1份 |
【操作步骤】
- 根据待测样本，阴性和阳性对照的数量准备微球试剂，将buffer微球和微球试剂用镊子夹到反应管中，保证每个酶微球试剂配一颗buffer微球；
- 按照每个反应分别加入2 μL上游引物、2 μL下游引物（引物浓度10 μM）、41 μL ddH2O和5 μL核酸模板（可根据实际需求调整加入模板的体积，并相应调整加入的ddH2O体积，至模板与ddH2O总体积为46 μL）配制反应混合液（注意：核酸模板要配制至反应混合液中，不可先复溶微球后加入模板）；
- 向每个微球反应管中加入50 μL步骤（2）配制的反应混合液，立刻迅速上下颠倒甩动反应管8-10次进行混匀；
- 混匀后，将反应液甩（或快速离心）至管子底部，然后立即将反应管放入恒温设备中37-39 ºC孵育30 mins；
- 反应结束后，加入Tris饱和酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）抽提液，1:1混匀抽提反应液，12000 rpm离心5 min，取5 μL上清进行琼脂糖凝胶电泳检测。（琼脂糖凝胶浓度建议为5%-2%）。
注：
- 高温变性不能有效去除蛋白，可能对产物分析造成影响；
- 市场上部分扩增产物纯化试剂盒
不适用，可能造成假阴性结果。
体系配制
| 组分 | 体积（μL） |
| 上游引物(10 μM)* | 2 |
| 下游引物(10 μM)* | 2 |
| ddH2O和DNA模板 | 46 |
| 总体积 | 50 |
*正对照反应单元体系配制：正对照模板加入2 μL，加入4 μL正对照引物Mix（包含上/下游引物），其他组分参照体系配制。
【注意事项】
1． 由于试剂盒灵敏度非常高，在进行反应时请注意避免核酸污染，并设置空白对照；
2． 使用时请取出实验所需的MIRA反应单元的数量，剩余部分请置于存储条件下。
